Suau'u mama Saposhnikovia divaricata mo moligao ma fasimoli faia fa'asalalauina si'isi'i suau'u taua fou mo fa'amumu fa'avevela ofe.
fa'amatalaga puupuu:
2.1. Sauniuniga ole SDE
O rhizomes o le SD na fa'atauina o se vao mago mai Hanherb Co. (Guri, Korea). O mea tau laau na faʻamaonia faʻamaonia e Dr. Go-Ya Choi o le Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM). O se pepa fa'ata'ita'iga (numera 2014 SDE-6) na teuina i le Korean Herbarium of Standard Herbal Resources. O rhizomes mago o le SD (320 g) na fa'aluaina fa'atasi ma le 70% ethanol (fa'atasi ma le 2 h reflux) ona fa'atumauina lea o le si'i i lalo o le fa'aitiitia o le mamafa. O le decoction sa faamama, lyophilized, ma teuina i le 4°C. E 48.13% (w/w) le maua mai o si'osi'omaga mamago mai mea amata.
2.2. Su'esu'ega Su'esu'e Su'e Su'e (HPLC).
Sa faia le su'esu'ega o le Chromatographic i se faiga HPLC (Waters Co., Milford, MA, ISA) ma se mea e iloa ai ata. Mo le iloiloga a le HPLC o le SDE,O-glucosylcimifugin standard na faʻatau mai le Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Korea), masec-O-glucosylhamaudol ma le 4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol na fa'a'esea i totonu o la matou fale su'esu'e ma fa'ailoa mai e ala i su'esu'ega fa'apitoa, fa'apitoa e le NMR ma le MS.
O fa'ata'ita'iga a le SDE (0.1 mg) na fa'amuta i le 70% ethanol (10 mL). O le vavaeeseina o le Chromatographic na faia i le XSelect HSS T3 C18 koluma (4.6 × 250 mm, 5).μm, Waters Co., Milford, MA, ISA). O le vaega feaveaʻi e aofia ai le acetonitrile (A) ma le 0.1% acetic acid i totonu o le vai (B) i le tafe o le 1.0 mL / min. Na faʻaaogaina se polokalame faʻasolosolo faʻasolosolo e pei ona taua i lalo: 5% A (0 min), 5-20% A (0-10 min), 20% A (10-23 min), ma le 20-65% A (23-40 min). ). O le umi o le galu na suʻesuʻeina i le 210-400 nm ma faʻamauina i le 254 nm. Ole tele ole tui ole 10.0μL. O vaifofo masani mo le fuafuaina o chromones e tolu na saunia i se fa'ai'uga mulimuli o le 7.781 mg/mL (prim-O-glucosylcimifugin), 31.125 mg/mL (4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol), ma le 31.125 mg/mL (sec-O-glucosylhamaudol) ile methanol ma teu ile 4°C.
2.3. Iloiloga o Gaoioiga Anti-Inflammatory GaoioigaI Vitro
2.3.1. Aganu'u Cell ma Togafitiga Fa'ata'ita'i
RAW 264.7 sela na maua mai le American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, ISA) ma ola i le DMEM medium e aofia ai le 1% antibiotics ma le 5.5% FBS. O sela na fa'a'ofuina i totonu o se ea susu o le 5% CO2 ile 37°C. Ina ia faʻaosofia sela, na suia le ala ile DMEM fou, ma le lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) ile 1μg / mL na faʻaopoopoina i le i ai poʻo le leai o se SDE (200 poʻo 400μg/mL) mo le 24 itula faaopoopo.
2.3.2. Fuafuaga ole Nitric Oxide (NO), Prostaglandin E2 (PGE2), Tumor Necrosis Factor-α(TNF-α), ma le Interleukin-6 (IL-6) Gaosiga
O sela na togafitia i le SDE ma faʻamalosia i le LPS mo le 24 itula. Leai se gaosiga na suʻesuʻeina e ala i le fuaina o le nitrite e faʻaaoga ai le Griess reagent e tusa ai ma se suʻesuʻega talu ai.12]. Fa'alilolilo o cytokine inflammatory PGE2, TNF-α, ma IL-6 na faʻamoemoeina e faʻaaoga ai se pusa ELISA (R&D system) e tusa ai ma faʻatonuga o le gaosiga. O aʻafiaga o le SDE ile NO ma le gaosiga o le cytokine na fuafuaina ile 540 nm poʻo le 450 nm e faʻaaoga ai le Wallac EnVision.™masini faitau tusi (PerkinElmer).
2.4. Iloiloga o Gaoioiga AntiosteoarthritisI Vivo
2.4.1. Manu
O tama'i iole Sprague-Dawley (7 vaiaso le matutua) na fa'atau mai Samtako Inc. (Osan, Korea) ma fa'anofo i lalo o tulaga fa'atonutonu ma le 12-h light/pouliuli ta'amilosaga ile°C ma% susū. Na maua i iole mea'ai ma vai su'esu'ead libitum. O faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga uma na faia e tusa ai ma taʻiala a le National Institutes of Health (NIH) ma faʻamaonia e le Komiti o le Tausiga ma Faʻaoga Manu a le iunivesite o Daejeon (Daejeon, republika o Korea).
2.4.2. Fa'aofiina o le OA ma MIA i Iole
O manu na faʻavasegaina ma tofia i vaega o togafitiga aʻo leʻi amataina le suʻesuʻega (ta'itasi vaega). MIA fofo (3 mg/50μL o le 0.9% saline) na tui saʻo i totonu o le vaeluaga o le tulivae taumatau i lalo o le faʻamaʻi faʻafefe faʻaosoina ma le faʻafefiloi o le ketamine ma le xylazine. Na vaevae faʻafuaseʻi isumu i ni vaega se fa: (1) le vaega saline e leai se tui MIA, (2) le vaega MIA ma le tui MIA, (3) le vaega SDE-togafitia (200 mg / kg) ma le tui MIA, ma le (4). ) le indomethacin- (IM-) kulupu togafitia (2 mg / kg) faʻatasi ma tui MIA. O isumu na tu'u tautala ma SDE ma IM 1 vaiaso a'o le'i tui MIA mo le 4 vaiaso. Ole fua ole SDE ma le IM na faʻaaogaina i lenei suʻesuʻega na faʻavae i luga o i latou na faʻafaigaluegaina i suʻesuʻega talu ai.10,13,14].
2.4.3. Fua o le tufaina o le mamafa o Hindpaw
Ina ua mae'a le fa'auluina o le OA, na fa'alavelaveina le ulua'i paleni i le gafatia o le fa'amama mamafa o hindpaws. O se suʻega faʻaletonu (Linton instrumentation, Norfolk, UK) na faʻaaogaina e iloilo ai suiga i le faʻapalepale mamafa. Sa tuu ma le faaeteete iole i totonu o le potu fua. O le malosi o le mamafa na fa'atinoina e le vae o le tua na fa'atatauina ile 3 s vaitaimi. O le fua faatatau o le tufaina o le mamafa sa fuafuaina e le fa'atusa lea: [mamafa i le vae taumatau/(mamafa i tua taumatau + mamafa i tua agavale)] × 100 [15].
2.4.4. Fua o le Serum Cytokine Levels
O faʻataʻitaʻiga toto na faʻapipiʻiina i le 1,500 g mo le 10 min i le 4 ° C; ona aoina lea o le serum ma teu i le -70 ° C seia oʻo ina faʻaaogaina. Ole maualuga ole IL-1β, IL-6, TNF-α, ma le PGE2 i le serum na fuaina e faʻaaoga ai pusa ELISA mai R & D Systems (Minneapolis, MN, ISA) e tusa ai ma faʻatonuga o le gaosiga.
2.4.5. Su'esu'ega RT-PCR Fa'ataimi Moni
O le aofaʻi o le RNA na maua mai le tuʻu faʻatasi o tulivae e faʻaaoga ai le TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ISA), toe faʻaliliu i totonu o le cDNA ma le PCR-faʻateleina e faʻaaoga ai le TM One Step RT PCR kit ma le SYBR green (Applied Biosystems). , Grand Island, NY, ISA). O le taimi moni o le PCR quantitative na faʻatinoina i le faʻaaogaina o le Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR system (Applied Biosystems, Grand Island, NY, ISA). O fa'asologa muamua ma le fa'asologa-su'esu'e o lo'o fa'aalia i le Laulau1. Aliquots o faʻataʻitaʻiga cDNAs ma se aofaʻi tutusa o le GAPDH cDNA na faʻateleina i le TaqMan® Universal PCR master mix o loʻo iai le DNA polymerase e tusa ai ma faʻatonuga o le gaosiga (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). O tulaga PCR e 2 min i le 50 ° C, 10 min i le 94 ° C, 15 s i le 95 ° C, ma le 1 min i le 60 ° C mo le 40 taamilosaga. Na fa'amauina le fa'atonuga o le kenera fa'atatau i le fa'atusatusaina o le Ct (numera o le ta'amilosaga o le fa'asologa i le va o le fa'atuputeleina o le fanua ma le faitoto'a), e tusa ai ma fa'atonuga o le gaosiga.
O le Osteoarthritis (OA) o le ma'i fa'alavelave fa'afuase'i ma fa'ama'i fa'ama'i fa'aleagaina i tagata matutua.1]. OA o se tulaga e mafua mai i se vaega o manuʻa, leiloa o le fausaga o le cartilage ma le gaioiga, ma le le faʻatonutonuina o auala faʻafefe ma anti-inflammatory [2,3]. E matua afaina ai le cartilage articular ma le ponaivi subchondral o sooga synovial ma iu ai i le toilalo sooga, e oʻo atu ai i le tiga i luga o le mamafa e aofia ai le savali ma le tu.4].
E leai se vaifofo mo le OA, aua e faigata tele ona toe faʻafoʻisia le cartilage pe a faʻaumatia [5]. O sini o togafitiga o le faʻamaloloina o le tiga, faʻamautu pe faʻaleleia le gaioiga faʻatasi, faʻateleina le malosi o sooga, ma faʻaitiitia aʻafiaga faʻaletonu o le faʻamaʻi. O togafitiga fa'afoma'i o le OA e fa'amoemoe e fa'aitiitia le tiga ina ia fa'ateleina ai galuega fa'atasi a le tagata ma'i ma le lelei o le olaga. E ui lava o le faʻaleagaina o le cartilage o le mea autu lea i le OA, o le faʻaleagaina o le collagen o le faʻalavelave faʻavae lea e fuafua ai le alualu i luma o le OA e fesoʻotaʻi ma le mumū [6,7]. Togafitiga faʻatasi ai ma gaioiga faʻamaʻi ma chondroprotective e faʻamoemoe e faʻamalolo ai le tiga ma faʻamautu ai le faʻamaoni matrix i tagata maʻi OA.
O le mea lea, o le faʻaitiitia o le mumū e ono aoga i le pulega o le OA. O suʻesuʻega talu ai nei o loʻo fautua mai ai le puipuiga mo punaoa o laʻau i luga o le alualu i luma o le OA, e tusa ai ma le faʻaitiitia o le mumū o le chondrocyte ma le faʻaleagaina atili o le cartilage, e ala i lo latou mafai ona fegalegaleai ma mea e fesoʻotaʻi faʻatasi, e mafua ai le faʻaitiitia o tiga faʻatasi.8].
O le a'a oSaposhnikovia divaricataSchischkin (Umbelliferae) ua faʻaaogaina lautele i vailaʻau faʻaleaganuʻu mo togafitiga o le ulu tiga, tiga, mumū, ma le gugu i Korea ma Saina [9,10]. O a'afiaga fa'afoma'i eseese oSaposhnikovia divaricata(SD) e aofia ai foʻi mea faʻamaʻi, faʻamalolo, antipyretic, ma antiarthritic properties [9,11]. O se suʻesuʻega talu ai nei na faʻaalia ai o le SD chromone extract o loʻo iai ni aʻafiaga faʻamaʻi faʻamaʻi faʻamaʻi i se faʻataʻitaʻiga o le isumu o le gasegase e mafua mai i le collagen [10]; ae ui i lea, o nai suʻesuʻega na faia e lagolago ai le gaioiga faʻamaʻi ma faʻamaʻi faʻamaʻi oSaposhnikovia divaricatafa'ailoga (SDE).
O le mea lea, o le suʻesuʻega o loʻo i ai nei na suʻesuʻeina ai gaioiga faʻamaʻi ma antiosteoarthritis o le 70% ethanol extract o SD. Muamua, na iloiloina le aafiaga anti-inflammatory a SDEin vitroi le LPS-fa'aosoina RAW 264.7 sela. O le isi, o le aʻafiaga o le antiosteoarthritis o le SDE na fuaina e ala i le iloiloina o le tufatufaina o le mamafa, faʻaleagaina o le cartilage articular, ma tali inflammatory i se faʻataʻitaʻiga o le monosodium iodoacetate- (MIA-) faʻaosoina OA.